-Detailed Information [JCRB0506]-

JCRB0506 TIG-3-20

細胞情報

Important Notice(s)

Notes for the cultivation of human normal diploid cells (JCRB05**) : ヒト正常二倍体細胞の取り扱い上の注意点

Notes for the cultivation of human normal diploid cells (JCRB05XX)

Some lots of cell lines registered as JCRB05XX were frozen by using glycerol as cryoprotectant instead of DMSO. The cryoprotectant used was described on data sheet of the cell line. In the case of cells frozen using glycerol, the method for re-cultivation should be as follows.

1. Thaw the ampule contents as quickly as possible in 37 C water bath.

2. Under sterile condition, aspirate the ampule contents (about 1 ml) and transfer them to culture dish (6-cm diameter) or 25cm2 culture flask containing 4 ml culture medium. Do not centrifuge the ampule contents, because the replacement of glycerol is very slow and centrifugation/resuspension causes osmotic shock to the cells.

3. Cultivate the cells in CO2 incubator at 37 C for 12-16 hrs.

4. Exchange the all culture medium by fresh medium.

JCRB05**番代で登録されているヒト正常二倍体細胞の凍結細胞アンプル取り扱い上の注意

ヒト正常細胞は、凍結アンプルを入手してから融解再培養のプロセスで、生存率の低下をおこしやすいとされています。細胞凍結アンプルの温度上昇を極力回避するよう、以下の点にご注意ください。

①細胞凍結アンプルの取り扱い

受領したヒト正常二倍体細胞は、その日のうちに保管容器に移すか融解再培養を行ってください。保管には液体窒素保存容器を推奨します。-80℃超低温槽での長期保管はお勧めしません。保管容器に移す場合は、移動プロセスの間での凍結アンプルの温度上昇が致命的になるので、これを可能な限り回避してください。例えばドライアイスからの取り出しを保管容器のすぐそばで行う、アンプルホルダーを前もって液体窒素で冷却して用いるなどです。

②凍結アンプルの融解再培養

融解再培養する場合は、ドライアイス入り輸送箱、または液体窒素凍結細胞保管容器から取りだした凍結アンプルを温度上昇させることなく（室温においたりすると致命的になります）、前もって用意した温水（約37℃）に素早くつけて、振りながら融解してください。

③JCRB05**番台の細胞には凍結保護剤としてDMSOを用いて凍結しているものとglycerolを用いて凍結しているものがあります（添付のデータシートに記載しています）。この二つでは融解・再培養の方法が異なります。

(1)DMSOを用いた場合の凍結細胞の融解・再培養

1. 凍結保存容器から取りだしたアンプルを、直ちに37℃-40℃の温水にいれて、軽く振りながら素早く解凍する（このステップが最も重要）。この際、ガラスアンプルの破裂の危険があるので、防護面や厚手の保護手袋を装着し、顔や首、手を防護すること。

2. ガラスアンプルを70%エタノールで消毒し、開封する。(アンプルのネックにはあらかじめヤスリが入っています)

3. 融解後、アンプルの内容（約1mlです）をパスツールピペットなどで吸いとり、9mlの冷やした培養液に加えて、1000 rpm，5 min 遠心する。細胞沈殿を5mlの培養液に浮遊し、6センチシャーレ一枚、または25cm2 フラスコ一本にいれて再培養を行う。(過度の希釈は増殖、生存率の低下を招きます)

(2)glycerolを用いた場合の凍結細胞の融解・再培養

1.2.はDMSOの場合と同じ手順で行う。

3. 融解後、4mlの培養液の入った培養ディッシュ（6センチシャーレ、または25cm2 フラスコ）に解凍したアンプルの内容を入れて炭酸ガスインキュベーターに静置する。翌日培地交換する。
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TIG-3細胞の性別について

TIG-3細胞は東京都老人総合研究所から細胞バンクに寄託された細胞です。

論文初出は、J. Gerontol. 37, 33-37 (1982)です。同論文中では、細胞の由来について10週令女性胎児と記載されていますが、樹立者らの分析により性別は後に男性であることが判明しており、文献もErratumにより訂正されております。バンクHPに記述の10週令男性胎児由来は正確な記述です。

文献的には『研究テーマ別 動物細胞培養マニュアル (共立出版)』の記事におきまして、TIG-3の由来は男性であるという記載が樹立者らによって記載されています。


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細胞種類：一般細胞 (細胞分譲手数料はこちら)

細胞番号(JCRB)	JCRB0506	細胞名	TIG-3-20
生物種(日本語)	ヒト	組織名(日本語)	肺
コメント(日本語)	正常二倍体線維芽細胞, 胎児肺由来, TIG-3 PDL=約20	プロフィール	Normal fibroblast cell line derived from Japanese fetal lung.
別名	TIG-3	動物名	human
系統名		学名・属名	Homo
種名	sapiens	性別
年齢・月齢		細胞識別情報
（癌）原発組織名	lung	病歴情報	normal
転移の有無（Y/N）		（癌）転移組織名
遺伝的性質	fetal lung, (M)	細胞寿命	finite
ｸﾗｲｼｽＰＤＬ	PDL=84	形態	fibroblast-like
一般性状	fetal lung, (M)	細胞分類	normal
細胞樹立者名	Tky.Inst.Geront.	細胞寄託者	Matsuo,M.
分譲時制限		コメント
入手年	1985	培養培地	Eagle's minimal essential medium with 10% fetal bovine serum
継代方法	Subculture every 7 days. Split ratio, 1/4. 0.25 % trypsin, 10-15 min.	継代時細胞数	6-8x10^4 cells/cm^2
人種	Japanese	炭酸ガス濃度	5 %
採取組織名	fetus lung	組織型

ウイルスDNA・RNA検出検査 (Detection of virus genome fragment by Real-time PCR)
ウイルスDNA 検出検査	tested				ウイルスRNA 検出検査	tested
	CMV	-	parvoB19	-		HCV	-	HTLV-1	-
	EBV	-	HBV	-		HIV-1	-	HTLV-2	-
	HHV6	-	HTLV-1	-		HIV-2	-	HAV	-
	HHV7	-	HTLV-2	-		-/negative. +/positive. nt/not tested. (positive (+) does not immediately mean the production of infectious viral particles.)
	BKV	-	HIV-1	-
	JCV	-	HIV-2	-
	ADV	-	HPV18	-
Notes

Link
Cellosaurus(ExPASy) Cellosaurus (ExPASy)はneXtProtプロジェクトの一環として、SIB - Swiss Institute of BioinformaticsのCALIPHOグループのAmos Bairoch博士によって開発されました。Cellosaurusは細胞株に関する様々な情報を集約させたデータベースになっています。JCRB細胞バンクに登録されている細胞株については、右のリンクから情報を得ることができます。	CVCL_3205

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Cellosaurus(ExPASy) Cellosaurus (ExPASy)はneXtProtプロジェクトの一環として、SIB - Swiss Institute of BioinformaticsのCALIPHOグループのAmos Bairoch博士によって開発されました。Cellosaurusは細胞株に関する様々な情報を集約させたデータベースになっています。JCRB細胞バンクに登録されている細胞株については、右のリンクから情報を得ることができます。

CVCL_3205

Reference
Pubmed id:7053395	Ploidy of human embryonic fibroblasts during in vitro aging. Matsuo M,Kaji K,Utakoji T,Hosoda K J Gerontol. 1982 Jan;37(1):33-7

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細胞番号	JCRB0506	細胞名
培養ロット番号	06272008	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (GIBCO Cat. # 10099, Lot 484375). This lot was forzen using DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	approx. 5 x 10^4 cells/ml	継代方法	0.25% trypsin and 0.02% EDTA. Passage twice a week.
増殖速度	approx. 1 day	凍結時生細胞濃度	2.0 x 10^6
凍結時生細胞率	94	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (7 at bank)	PDL数（プライマリ）	19
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率		追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名
培養ロット番号	09122003	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimal essential medium with 10% fetal bovine serum. This lot was frozen with DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	split ratio 1:4 - 1:6.	継代方法	0.25% trypsin and 0.02% EDTA
増殖速度	ca. 1.5 days	凍結時生細胞濃度	1.5 x 10^6
凍結時生細胞率	87.4	使用抗生物質	free
継代数	P3*	PDL数（プライマリ）	27
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	Confirmed as human by NP, G6PD (type B), AST, LD.
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS in EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率		追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名	TIG-3-20
培養ロット番号	R033	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimal essential medium with 10% fetal bovine serum.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	split ratio = 1/4	継代方法	Refer attached infomation.
増殖速度	NT	凍結時生細胞濃度	tow dishes
凍結時生細胞率	NT	使用抗生物質	100 ug/ml streptomysin, 100 units/ml penicillin
継代数		PDL数（プライマリ）	PDL21
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	NT	細菌汚染検出	NT
真菌汚染検出	NT	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	NT
染色体モード	46,XY	染色体情報	NT
表面抗原	NT	DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子	NT
凍結培地	Culture medium with glycerol (concentration not described).	炭酸ガス濃度	5 %
解凍後生細胞率		追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名
培養ロット番号	R032	培養種別	distribution
培地	MEM + 10% FCS (this ampule was freezed using glycerol)	培養温度	37
継代時細胞数（濃度）	6-8x10^4	継代方法	Subculture every 7 days. Split ratio, 1:4. 0.25% trypsin, 10-15 min.
増殖速度		凍結時生細胞濃度
凍結時生細胞率		使用抗生物質
継代数		PDL数（プライマリ）	24PDL
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出		細菌汚染検出
真菌汚染検出		ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性		導入外部遺伝子
凍結培地		炭酸ガス濃度
解凍後生細胞率		追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名
培養ロット番号	R034	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimal essential medium with 10% fetal bovine serum. This lot of ampoule was frozen using glycerol.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	split ratio 1:4	継代方法	0.25% trypsin
増殖速度		凍結時生細胞濃度	5.7 x 10^6
凍結時生細胞率	90.6	使用抗生物質	100 ug/ml streptomycin and 100 units/ml penicillin
継代数		PDL数（プライマリ）	22
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	NT
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	Culture medium containing 10% glycerol.	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率		追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名	TIG-3-20
培養ロット番号	11272014	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (FBS; GIBCO Cat. # 10091). This lot was frozen using DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	3.7 - 4.7 x 10^4 cells/mL	継代方法	Cells were harvested after treatment with 0.25% trypsin and 0.02% EDTA.
増殖速度	D.T. = approx. 52 hrs	凍結時生細胞濃度	2.5 x 10^6
凍結時生細胞率	84	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (7 at bank)	PDL数（プライマリ）	21.6
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	Confirmed as human by NP, G6PD (type B) MD.
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率	84.0	追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名	TIG-3-20
培養ロット番号	07262017	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (FBS; Sigma Cat. # 172012). This lot was frozen using DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	2.4 - 8.1 x 10^4 cells/mL	継代方法	Cells were harvested after treatment with 0.25% trypsin and 0.02% EDTA.
増殖速度	approx. 30 hrs.	凍結時生細胞濃度	2.5 x 10^6
凍結時生細胞率	85.2	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (7 at bank)	PDL数（プライマリ）	19.2
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率	85.2	追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名	TIG-3-20
培養ロット番号	02192019	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (FBS; Sigma Cat. # 172012). This lot was frozen using DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	approx. 5 x 10^4 cells/mL	継代方法	Cells were harvested after treatment with 0.25% trypsin and 0.02% EDTA.
増殖速度	approx. 1.5 days.	凍結時生細胞濃度	2.2 x 10^6
凍結時生細胞率	91	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (6 at bank)	PDL数（プライマリ）	19.6
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)	D5S818:10,13 D13S317:9,12 D7S820:10,12 D16S539:10 VWA:16,17 TH01:7,9 AM:X,Y TPOX:11 CSF1PO:11,12
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率	91	追加情報

細胞番号	JCRB0506	細胞名	TIG-3-20
培養ロット番号	02242023	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium (GIBCO:　catalogNo.11095-080) with 10% fetal bovine serum (SIGMA, Cat#172012, Lot#12J396, not HI)	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	1.9-3.6x10^4 cells/sq.cm	継代方法	Cells were harvested after treatment with 0.025% trypsin-EDTA.　（Split ratio:1/4）
増殖速度	NT	凍結時生細胞濃度	2.9x10^6
凍結時生細胞率	100.00	使用抗生物質	free
継代数	ｐ7*	PDL数（プライマリ）	20.1
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名
染色体モード	NT	染色体情報	NT
表面抗原	NT	DNA Profile (STR)	D5S818:10,13 D13S317:9,12 D7S820:10,12 D16S539:10 VWA:16,17 TH01:7,9 AM:X,Y TPOX:11 CSF1PO:11,12
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	BAMBANKER(LYMPHOTEC Inc.,CS-02-001,NIPPON Genetics Co., LTD)	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率	97.8	追加情報

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国立研究開発法人 医薬基盤・健康・栄養研究所 JCRB細胞バンク

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