Eagle's minimal essential medium with non-essential amino acids and serum for test.

温度　３７℃
湿度　１００％
CO2　５％

JCRB9128：Mv 1 Lu (P50)

注：Mv 1 Lu 細胞は、血清に対する感受性が高い。

1x10⁴ cells/well

24well Microplate(FALCON cat.No.3047)

1. 被検血清を段階的濃度で含む培地をあらかじめ準備した。15ml の試験管に被検査血清濃度が 0.1% 0.3%, 1%, 3%, 10%, 30% の各濃度となるように調整した培地を予め用意する。

2. 24 well の Microplate に 2 well づつ段階希釈した培地1mlを入れてインキュベータで事前に暖めておく。

3. サブコンフルエントからコンフルエントの状態まで培養した Mv 1 Lu 細胞を用意する。

4. Mv 1 Lu 細胞をトリプシン溶液で分散した後、２回基礎培地（血清を含まず）で洗浄する。
   細胞をこの基礎培地に約 1x10⁶ cells/ml の濃度で再浮遊させる。

5. 手順 2) で用意した 24 well の Microplate にこの細胞を 10μl づつマイクロピペットで加える。

6. 5日間培養（3日目に培地交換）した後、細胞の増殖を判定する。
   判定には、細胞の状態の観察、クリスタルバイオレットで染色した後観察、酵素で細胞をはがした後細胞数を測定する等の方法を用いて、その増殖支持能を比較した。

1. 培養液を取り除き2回 PBS 洗浄。

2. 4% ホルマリン溶液 1ml/well を加え 20分以上室温放置。

3. ホルマリン溶液を取り除き良く水洗。

4. 固定した細胞に0.2％クリスタルバイオレット溶液を各 well に 1ml づつ加え、5分室温放置。

5. クリスタルバイオレット溶液を取り除き、良く水洗する。

   注：血清の検定に際してはＢＶＤＶ検査を別途実施し、その結果と本結果を照合して最適なものを選抜した。

検査結果の一部を示した。

1. 細胞の観察結果

2. クリスタルバイオレット染色結果

3. クリスタルバイオレット染色結果のグラフ化