ＪＣＲＢ細胞バンク：大西清方
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1. 蛋白加水分解物

培養細胞の栄養要求も基本的に微生物と類似しているので, 微生物用培地に古くから使用されてき た各種の蛋白加水分解物が，前述したように組織培養でも使用されてきた. 最もよく使用されるのは ラクトアルブミン加水分解物(lactoalbumin hydrolysate)，カゼイン加水分解物(casein hydrolysate) である．細胞培養には普通酵素水解した製品が使用される. アミノ酸以外にかなりの量のペプチドを含み, またアミノ酸組成もロットによってかなり異なるのが普通である. したがってこれを使用して培養結果が一定になるとは限らない．アミノ酸源として 0.4-0.5% になるように培養液に添加し, 非常に多数の種類の細胞の培養に用いられている.

非常に吸湿性の高い粉末なので, 手早く所定量を計り取り水に溶かし, 薬包紙に付着している分も 水で流し込む. 吸湿性の割には水に溶けにくく, 濃厚保存液としては 5% が限度である. グルタミンと同様に熱に不安定であり漉過滅菌が望ましい.

GIBCO BRL の製品で，Cat. No. 320-1250AG, Earle's BSS に 0.65% に溶解した製品があるが，上記の 5% 保存液を自家調製した方良い．

2. 酵母エキス

酵母エキス(yeast extract)はビタミン源としてよく培養液に添加される. これはやはり極めて吸 湿性である. 滅菌は1 気圧 10 分程度の高圧蒸気滅菌を行う. 培養液の添加量は最終濃度 1-0.05% であるが, それぞれの細胞の培養について至適濃度を検討する必要がある. 酵母エキスには，カルシウム塩も含まれているので細胞が凝集塊をつくりやすい. 接着性細胞を浮遊培養に適応させた培養法で，Joklik の培養液を使用するときは添加できない.

大日本製薬株式会社は，Flow Laboratories の製品，Cat. No. 30-003-49, 25% イースト抽出 液として販売されている．

3. 35% ぶどう糖液

試薬特級無水ぶどう糖を蒸留水に溶解して 35% 溶液を調製する. ぶどう糖液はオートクレーブ滅 菌してはいけない. 高熱でカラメル化し着色する. 0.02 ミクロンのメンブランフィルターで漉過滅 菌し, 約 20 ml づつ小分けして密栓保存する. 使用に際しては, High glucose と指定されている 培養液に 1 L 当り 10 ml 添加する. 　

4. アミノ酸液

1. Basal Medium, Eagle 用, グルタミン不含

   組織培養用添加物として 100 倍液，FLOW LABORATORIES の製品が大日本製薬株式会社(16-001-49, 100 ml), GIBCO の製品がライフテックオリエンタル株式会社(320-1051AG 100, ml)から市販されている．Earle, Hanks の塩類溶液に 1% に添加し(グルタミンを規定量添加しなければならない)，後述するビタミン液を同様に 1% に添加すると Basalmedium, Eagle を調製できる．またアミノ酸総量を 2 倍にして使用する場合に既製の Basal Medium Eagle に添加して使用する．

2. Minimal Essential Medium 用，グルタミン不含

   組織培養用添加物として 50 倍液，FLOW LABORATORIES の製品が大日本製薬株式会社(16-011-49, 100 ml), GIBCO の製品がライフテックオリエンタル株式会社(320-1130 AG, 100 ml)から市販されている．Earle, Hanks の塩類溶液に 2% に添加し (グルタミンを規定量添加しなければならない)，後述するビタミン液を同様に 1% に添加すると Basal Medium, Eagle を調製できる．またアミノ酸総量を 2 倍にして使用する場合に既製の Minimal Essential Medium に添加して使用する．

5.　非必須アミノ酸 (non-essential amino acids)

培養液に非必須アミノ酸を添加することがある．FLOW LABORATORIES の製品が大日本製薬株式会社(16-810-49, 100 ml), GIBCOの製品がライフテックオリエンタル株式会社(320-1140 AG, 100 ml), 三光純薬などから 100 倍濃度で，100 ml 容の製品が販売されている．

6.　ビタミン類

1. Basal Medium, Eagle 用

   100 倍液，FLOW LABORATORIES の製品が大日本製薬株式会(16-004-49, 100 ml), GIBCO 社の製品がライフテックオリエンタル株式会社(320-1040 AG, 100 ml), 三光純薬などから 100 ml 容の製品が販売されている．

2. Minimal Essential Medium 用

   100 倍液, FLOW LABORATORIES の製品が大日本製薬株式会社(16-014-49, 100 ml)，GIBCO 社の製品がライフテックオリエンタル株式会社(320-1120 AG, 100 ml)などから販売されている．

7. Na-pyruvate 液

培養液に Na-pyruvate を添加することがある．100 倍液，FLOW LABORATORIESの製品が大日本 製薬株式会社(16-820-49, 100 mM, 11.00 mg/ml, 100 ml), GIBCO RBL 社の製品がライフテック オリエンタル株式会社(320-1360 AG, 100 mM, 11.004 mg/ml, 100 ml)三光純薬などから 100 倍 濃度で，100 ml 容の製品が販売されている．

8. Tryptose Phosphate Broth(TPB)

(DIFCO, Bacto Tryptose 20 g, Bacto Dextrose 2g, NaCl 5 g, Na2HPO4 2.5g)

一般的な使用法は培養液に 10% に添加するが, これは粉末として 10% に添加するのではなく, 粉末の Tryptose phosphat broth を 29.5 g を 1 L に溶解し，121 ℃ 15 分滅菌した溶液を調 製し培養液に指定された量を添加する.

9. 1 M-HEPES 液 (HEPES)

(2-Hydroxyethypiperazine N-2-ethansulfonic acid. M.W = 238.3). 大日本製薬株式会社より，Cat. No. 16-884-49, 1Mヘペス緩衝液，GIBCO RBL 社の製品がライ フテックオリエンタル株式会社より，Cat. No. 380-5630AG, 100 ml, HEPES バッファー液として 販売されている．20〜50 mM で使用する．

自家調製をするときは，2.38 g の HEPES を秤量して水に溶解して 100 ml とし，高圧蒸気滅菌 する．