• 肝細胞の継代については，トリプシンを除去するための作業が細胞に大きな障害を与えるため，特別な理由が無い限り避けるべきである．ＪＣＲＢ０４ｘｘシリーズの細胞がうまく生育しないという疑問に対してこの点を指摘すると驚くほど細胞の生存率が上がったという感想が聞かれる．

• 肝細胞の培養は１ー１０日に１回ごとに，細胞密度を４分の１に希釈して継代培養を行い，その間に一度培地交換をするのが適切である．

• ＪＣＲＢ０４０１：ＨｕＨ-６の場合は，細胞がはがれにくいので，トリプシンーＥＤＴＡ処理を３回おこない，０．５ｍｌほどを残したまま１０ー２０分インキュベートする．

  細胞データベースに記載されていた培地の処方については，最近のデータを元に大幅に修正を加えた．

低面積２５平方ｃｍのフラスコを利用する場合

1. 培養液を除去する．

2. １枚の１０ｃｍシャーレあたり２ｍｌのトリプシン−ＥＤＴＡ溶液を加え，全体に良く回した後直ちに０．５ｍｌ程度を残して捨て去る．

3. その後５分ほど３７度Ｃで保温する．

4. トリプシン−ＥＤＴＡ処理後，新鮮な培地１.５ｍｌを加えてピペット操作により十分細胞を浮遊させる．

5. ４分の１希釈で継代する場合は，細胞浮遊液を０.５ｍｌ残して残りを捨てる．

6. ４.５ｍｌの新鮮な培養液をこれに加え，ボトルのキャップをゆるめて３７度ＣのＣＯ２インキュベーターに一日静置した後，翌日キャップを閉めて３７度で培養を継続する．