-Detailed Information [JCRB0540]-

JCRB0540 TIG-119

細胞情報

Important Notice(s)

Notes for the cultivation of human normal diploid cells (JCRB05**) : ヒト正常二倍体細胞の取り扱い上の注意点

Notes for the cultivation of human normal diploid cells (JCRB05XX)

Some lots of cell lines registered as JCRB05XX were frozen by using glycerol as cryoprotectant instead of DMSO. The cryoprotectant used was described on data sheet of the cell line. In the case of cells frozen using glycerol, the method for re-cultivation should be as follows.

1. Thaw the ampule contents as quickly as possible in 37 C water bath.

2. Under sterile condition, aspirate the ampule contents (about 1 ml) and transfer them to culture dish (6-cm diameter) or 25cm2 culture flask containing 4 ml culture medium. Do not centrifuge the ampule contents, because the replacement of glycerol is very slow and centrifugation/resuspension causes osmotic shock to the cells.

3. Cultivate the cells in CO2 incubator at 37 C for 12-16 hrs.

4. Exchange the all culture medium by fresh medium.

JCRB05**番代で登録されているヒト正常二倍体細胞の凍結細胞アンプル取り扱い上の注意

ヒト正常細胞は、凍結アンプルを入手してから融解再培養のプロセスで、生存率の低下をおこしやすいとされています。細胞凍結アンプルの温度上昇を極力回避するよう、以下の点にご注意ください。

①細胞凍結アンプルの取り扱い

受領したヒト正常二倍体細胞は、その日のうちに保管容器に移すか融解再培養を行ってください。保管には液体窒素保存容器を推奨します。-80℃超低温槽での長期保管はお勧めしません。保管容器に移す場合は、移動プロセスの間での凍結アンプルの温度上昇が致命的になるので、これを可能な限り回避してください。例えばドライアイスからの取り出しを保管容器のすぐそばで行う、アンプルホルダーを前もって液体窒素で冷却して用いるなどです。

②凍結アンプルの融解再培養

融解再培養する場合は、ドライアイス入り輸送箱、または液体窒素凍結細胞保管容器から取りだした凍結アンプルを温度上昇させることなく（室温においたりすると致命的になります）、前もって用意した温水（約37℃）に素早くつけて、振りながら融解してください。

③JCRB05**番台の細胞には凍結保護剤としてDMSOを用いて凍結しているものとglycerolを用いて凍結しているものがあります（添付のデータシートに記載しています）。この二つでは融解・再培養の方法が異なります。

(1)DMSOを用いた場合の凍結細胞の融解・再培養

1. 凍結保存容器から取りだしたアンプルを、直ちに37℃-40℃の温水にいれて、軽く振りながら素早く解凍する（このステップが最も重要）。この際、ガラスアンプルの破裂の危険があるので、防護面や厚手の保護手袋を装着し、顔や首、手を防護すること。

2. ガラスアンプルを70%エタノールで消毒し、開封する。(アンプルのネックにはあらかじめヤスリが入っています)

3. 融解後、アンプルの内容（約1mlです）をパスツールピペットなどで吸いとり、9mlの冷やした培養液に加えて、1000 rpm，5 min 遠心する。細胞沈殿を5mlの培養液に浮遊し、6センチシャーレ一枚、または25cm2 フラスコ一本にいれて再培養を行う。(過度の希釈は増殖、生存率の低下を招きます)

(2)glycerolを用いた場合の凍結細胞の融解・再培養

1.2.はDMSOの場合と同じ手順で行う。

3. 融解後、4mlの培養液の入った培養ディッシュ（6センチシャーレ、または25cm2 フラスコ）に解凍したアンプルの内容を入れて炭酸ガスインキュベーターに静置する。翌日培地交換する。
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細胞種類：一般細胞 (細胞分譲手数料はこちら)

細胞番号(JCRB)	JCRB0540	細胞名	TIG-119
生物種(日本語)	ヒト	組織名(日本語)	皮膚
コメント(日本語)	正常二倍体線維芽細胞, 皮膚由来	プロフィール	Normal human diploid cell from skin.
別名		動物名	human
系統名		学名・属名	Homo
種名	sapiens	性別	M
年齢・月齢	6-year-old	細胞識別情報	available
（癌）原発組織名	skin	病歴情報	normal
転移の有無（Y/N）		（癌）転移組織名
遺伝的性質	2N=46, XY	細胞寿命	finite
ｸﾗｲｼｽＰＤＬ		形態	fibroblast-like
一般性状	Maximum PD = 48. Cells may be distributed around PD15 - PD20.	細胞分類	normal
細胞樹立者名	Tokyo Metropolitan Institute of Gerontrogy (TMIG)	細胞寄託者	TMIG
分譲時制限		コメント
入手年	2003	培養培地	Eagle's minimal essential medium with 10% fetal bovine serum.
継代方法	Wash in CMF-PBS.Add 0.25% trypsin.Incubate at 37C for 10-15min.Suspend cells in medium.	継代時細胞数	5 x 10^4 cells/sq.cm.
人種	Japanese	炭酸ガス濃度
採取組織名	skin	組織型

ウイルスDNA・RNA検出検査 (Detection of virus genome fragment by Real-time PCR)
ウイルスDNA 検出検査	tested				ウイルスRNA 検出検査	tested
	CMV	-	parvoB19	-		HCV	-	HTLV-1	-
	EBV	-	HBV	-		HIV-1	-	HTLV-2	-
	HHV6	-	HTLV-1	-		HIV-2	-	HAV	-
	HHV7	-	HTLV-2	-		-/negative. +/positive. nt/not tested. (positive (+) does not immediately mean the production of infectious viral particles.)
	BKV	-	HIV-1	-
	JCV	-	HIV-2	-
	ADV	-	HPV18	-
Notes

Link
Cellosaurus(ExPASy) Cellosaurus (ExPASy)はneXtProtプロジェクトの一環として、SIB - Swiss Institute of BioinformaticsのCALIPHOグループのAmos Bairoch博士によって開発されました。Cellosaurusは細胞株に関する様々な情報を集約させたデータベースになっています。JCRB細胞バンクに登録されている細胞株については、右のリンクから情報を得ることができます。	CVCL_3201

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Cellosaurus(ExPASy) Cellosaurus (ExPASy)はneXtProtプロジェクトの一環として、SIB - Swiss Institute of BioinformaticsのCALIPHOグループのAmos Bairoch博士によって開発されました。Cellosaurusは細胞株に関する様々な情報を集約させたデータベースになっています。JCRB細胞バンクに登録されている細胞株については、右のリンクから情報を得ることができます。

CVCL_3201

Reference
Pubmed id:7556460	Fetal-adult phenotype transition, in terms of the serum dependency and growth factor requirements, of human skin fibroblast migration. Kondo H,Yonezawa Y Exp Cell Res. 1995 Oct;220(2):501-4

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細胞番号	JCRB0540	細胞名
培養ロット番号	10162009	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (GIBCO Cat. # 10099). This lot was frozen using DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	1.8 - 2.5 x 10^4 cells/ml	継代方法	0.25% trypsin and 0.02% EDTA
増殖速度	approx. 29 hrs	凍結時生細胞濃度	1.1 x 10^6
凍結時生細胞率	98.1	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (3 at bank)	PDL数（プライマリ）	20
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	Confirmed as human by NP, G6PD (type B), MD.
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率		追加情報

細胞番号	JCRB0540	細胞名	TIG-119
培養ロット番号	06052013	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimal essential medium with 10% fetal bovine serum. (FBS; GIBCO Cat. #10099). This lot was frozen using DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	2.6 - 4.7 x 10^4 cells/sq.cm.	継代方法	Wash in CMF-PBS.Add 0.25% trypsin.Incubate at 37C for 10-15min.Suspend cells in medium.
増殖速度	53 - 65 hr	凍結時生細胞濃度	1.7 x 10^6
凍結時生細胞率	77.8	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (4 at bank)	PDL数（プライマリ）	30.1
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	Confirmed as human by NP, G6PD (type B), MD.
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率	77.8	追加情報

細胞番号	JCRB0540	細胞名	TIG-119
培養ロット番号	09022016	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (FBS; Sigma Cat. # 172012). This lot was frozen using DMSO.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	1.5 - 4.7 x 10^4 cells/mL	継代方法	Cells were harvested after treatment with 0.25% trypsin and 0.02% EDTA.
増殖速度	approx. 23 hrs.	凍結時生細胞濃度	1.1 x 10^6
凍結時生細胞率	89.0	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (3 at bank)	PDL数（プライマリ）	PDL = 17.7
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率	89.0	追加情報

国立研究開発法人 医薬基盤・健康・栄養研究所 JCRB細胞バンク

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