国立研究開発法人 医薬基盤・健康・栄養研究所 JCRB細胞バンク

[問題が該当する細胞株]
JCRB0601 BALB/3T3 A31-1-1
IFO50070 Balb/3T3-A31-1-1
IFO50299 Balb/c 3T3 A31-1-13
IFO50298 Balb/c 3T3 A31-I-1
JCRB0149 Bhas 42
JCRB1355 1-1ras1000
JCRB1356 A31-1-1
JCRB1357 1-1 src
	
これらの細胞は、マウス系統解析から、Swissマウスに由来する細胞であり、Balb/c 3T3 clone A31に由来する細胞ではないことが判明しました。

Balb/c 3T3 A31-1-1, Balb/c 3T3 A31-1-13細胞は、親株をBalb/c 3T3 clone A31細胞とするサブクローンとして、角永先生の研究室（当時National Cancer Intitute）で樹立されました。これらのサブクローンは、親株のA31よりも化学発癌物質によるトランスフォーメーションに適するものとされ、世界的に広く利用されています。JCRB細胞バンクにも複数のルートから寄託されました。なお、IFO50070番で登録された株は、角永先生から直接バンクに寄託されたものです。
その後、さらに他の研究室によりBalb/c 3T3 A31-1-1を親株として遺伝子導入された細胞株、Bhas 42, 1-1ras1000, 1-1 srcが樹立され、JCRB細胞バンクに寄託されました。

しかし、JCRB細胞バンクが細胞の由来を確かめる目的で、これらの細胞株のマウス系統解析を行ったところ、角永先生の研究室で樹立されたこれらのサブクローン、および、A31-1-1に派生する細胞株はすべてSwissマウス由来であることがわかりました。

一方、元々の親株とされるBalb/c 3T3 clone A31細胞は、正しくBalb/cマウス由来であることが確認されました。

角永先生はすでにかなり前に逝去されており、どのような状況でこのような事態が生じたのかは確認ができませんが、Balb/c 3T3 A31-1-1 A31-1-13は、何らかの混同、あるいは誤認によりSwissマウスの線維芽細胞をクローンとして拾って樹立した株ということになります。

これらの細胞株は、歴史的にも広く用いられてきた経緯、あるいは試験法に記載されてきた経緯等があり、その有用性は失われておりません。このため、JCRB細胞バンクでは、これらの細胞の登録を抹消せず、分譲を継続しています。しかし、上記細胞の使用に関しては、Balb/c 3T3 clone A31細胞とは系統が異なる細胞であることをご了解ください。

例えば、もし、枝番がついていないA31細胞としての性質を求めるのであれば（たとえばOECDの光毒性試験など)、JCRB9005で登録されているBALB/3T3 clone A31のご利用をご検討ください。

一方、角永らにより樹立された、トランスフォームしやすいとされる細胞のご利用をお考えの場合、または、論文の追試や、試験法などで細胞名が明記されている場合には、マウス系統の問題はあるものの、その使用は妥当となります。

つきましては、細胞のご研究への適合性についてご留意くださいますようお願い申し上げます。

参考文献：In Vitro Cell Dev Biol Anim. http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs11626-016-0104-3


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[The cell lines in problem]

JCRB0601 BALB/3T3 A31-1-1
IFO50070 Balb/3T3-A31-1-1
IFO50299 Balb/c 3T3 A31-1-13
IFO50298 Balb/c 3T3 A31-I-1
JCRB0149 Bhas 42
JCRB1355 1-1ras1000
JCRB1356 A31-1-1
JCRB1357 1-1 src

These cell lines have been proved to be derived from Swiss mouse cells, but not from the derivative of Balb/c 3T3 clone A31.

Balb/3T3 A31-1-1 and A31-1-13 were reported to be isolated from Balb/3T3 clone A31 by Dr. Kakunaga at National Cancer Institute in 1980 (Science 209: 505-507, 1980). These cell lines were reported to be useful for the study of chemically induced transformation of cells, and were widely used in the world. These cell lines were deposited at JCRB Cell Bank from different deposition routes. For example, IFO50070 strain was the one that was directly deposited by Dr. Kakunaga.

Thereafter, several laboratories developed genetically modified cell lines from Balb/c 3T3 A31-1-1. These are Bhas 42, 1-1ras1000, 1-1 src,  and were also deposited at JCRB Cell Bank.

JCRB Cell Bank took place an analysis of mouse strain to check the origin of these cell lines. During this analysis, we found that  A31-1-1, A31-1-13 and all these derivatives are NOT derived from Balb/c mouse, but from Swiss mouse.

Wheras, the parental cell line, Balb/c 3T3 clone  A31 was confirmed as Balb/c mouse origin.

Dr. Kakunaga passed away in 1988, and unfortunately we can not trace the situation and cause of problem on this matter. However, it is suspected that the Balb/3T3 A31-1-1 and A31-1-13 subclones used in his laboratory was mistakenly establihed (cloned) from Swiss mouse-derived fibroblasts.

These cell lines have been historically used in worldwide, or have been described in test guidelines, and therefore the still valuable for research and testing. For this reason, JCRB does not exclude these cell lines from catalog and continues distribution of them. However, please keep in mind that these cell lines are not Balb/3T3 A31-derived cells.

For example, If your research needs the characteristics of Balb/c 3T3 clone A31 (such as OECE test guideline "In vitro 3T3 NRU phototoxicity test"), please consider to use JCRB9005 BALB/3T3 clone A31.

Wheras if you will use the cells established by Kakunaga for transformation studies, or if the name of cell lines are clearly described in the paper or test guidelines, these cell lines are still available for use regardless to the mouse strain problem.

Sincerely,

JCRB Cell Bank

References: In Vitro Cell Dev Biol Anim. Http://link.springer.com/article/10.1007%2 Fs 11626-016-0104-3
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• 09202011
• 05142008
• 043096
• 021486
• 950821

細胞番号	JCRB0601	細胞名
培養ロット番号	09202011	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (FBS: GIBCO Cat. # 10099)	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	approx. 1 x 10^4 cells/mL	継代方法	Cells were harvested after treatment with 0.25% trypsin and 0.02% EDTA
増殖速度	approx. 1 day	凍結時生細胞濃度	1.5 x 10^6
凍結時生細胞率	97.3	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (6 at benk)	PDL数（プライマリ）
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	Confirmed as mouse by NP, G6PD, MD.
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率		追加情報

Images

細胞番号	JCRB0601	細胞名	Balb/3T3-A31-1-1
培養ロット番号	05142008	培養種別	distribution
培地	Eagle's minimum essential medium with 10% fetal bovine serum (FBS Lot; GIBCO Cat. No. 10099, Lot 484375) // The number on the label is misprinted: the correct number is JCRB0601.	培養温度	37 C
継代時細胞数（濃度）	1 x 10^4 cells/ml	継代方法	0.25% trypsin and 0.02% EDTA. Passage twice a week. Do not allow the culture to be full confluency.
増殖速度	18 hrs	凍結時生細胞濃度	3.5 x 10^6
凍結時生細胞率	98.8	使用抗生物質	free
継代数	Unknown (6 at bank)	PDL数（プライマリ）
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	Confirmed as mouse by NP, G6PD, MD.
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性	Yes	導入外部遺伝子
凍結培地	10% DMSO, 20% FBS - EMEM	炭酸ガス濃度	5%
解凍後生細胞率		追加情報

Images

細胞番号	JCRB0601	細胞名	BALB/3T3 A31-1-1
培養ロット番号	043096	培養種別	distribution
培地		培養温度
継代時細胞数（濃度）		継代方法
増殖速度		凍結時生細胞濃度
凍結時生細胞率		使用抗生物質
継代数	P6*	PDL数（プライマリ）
ﾏｲｺﾌﾟﾗｽﾞﾏ検出	-	細菌汚染検出	-
真菌汚染検出	-	ｱｲｿｻﾞｲﾑ検査・動物名	Confirmed as a mouse by LDH, NP and G6PD.
染色体モード		染色体情報
表面抗原		DNA Profile (STR)
接着性		導入外部遺伝子
凍結培地		炭酸ガス濃度
解凍後生細胞率		追加情報

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