【勝田班月報：７２１２：RRLC-11の放出する毒性物質】

§各種ラッテ肝癌細胞の培地内に放出する毒性代謝物質：

　先ず、細胞を加えていない、合成培地DM-145をSephadexG-10或はG-25で分劃し、230mμでの吸収曲線をみた（図を呈示）。

　[細胞]8種：JTC-1(ラッテ腹水肝癌AH-130由来)、JTC-2(ラッテ腹水肝癌AH-130由来)、JTC-15(ラッテ腹水肝癌AH-66由来・可移植性が低い)、JTC-16(ラッテ腹水肝癌AH-7974由来）、JTC-16・P3(JTC-16の完全合成培地内継代亜株)、JTC-27(ラッテ腹水肝癌AH-601由来)、CulbTC(4NQOで培養内癌化したRLT-2の復元腫瘍の再培養株)、RLC-10(2)(対照として、肝癌でないラッテ肝細胞株。テストに用いた株と同株)。

　（図を呈示）結果は、縦軸に3日間の<実験群の増殖率>を<無添加の対照群の増殖率>で割った％をとった。これまで、毒性物質の分劃をすすめるとき、その非活性の計算の根拠に困っていたのであるが、今後はこの方法を採用したいと思う。

　G-10、G-25で分劃したものは、Void volumeをすて塩の出てくる手前までを凍結乾燥し、乾燥重量を測って培地に加えた。判ったことは、肝癌培地は、いずれも濃度に比例してRLC-10(2)の増殖を抑えていること、但しその抑え方は、G-10とG-25とで必ずしも平行していないこと、RLC-10(2)の培地はむしろ増殖を促進していること、などであろう。

　これにより、われわれの追っている毒性物質は各種肝癌に共通したものである疑が濃厚になってきた。またRLC-10(2)の培地の分劃が増殖を促進することより、いわゆるconditioned medium中の低分子物質の役割、このような粗分劃によってもconditioned mediumの効果を促進できる可能性などを考えさせられることになる。

：質疑応答：

［高岡］日本真空のdiafilterを使っています。分子量10,000以下の濾液を凍結乾燥してカラムへかけています。

［山田］RLC-10(2)を培養した培地は自らの増殖を促進するのですね。

［勝田］一種のconditioned mediumと考えられます。

［堀川］Conditined mediumだけでは説明がつかないのではないでしょうか。Homoとheteroの問題もありますから。

［黒木］これらの分劃の4mg/mlは分劃前の培地の何％に相当するのですか。

［高岡］40％です。この段階では非活性は上がっていません。

《高木報告》

　
1. 培養内悪性化の示標について

   　血清因子除去血清の作製法として次の2つの方法を試みた。

   　
   1. )硫安塩析後蒸留水で48時間透析し、凍結乾燥してHanks液で原量にもどす。(1/3FCS) 　
   2. )硫安塩析後蒸留水で48時間透析し、さらにHanks液(重曹を含まない)で12時間透析する。(1/3FCS)
   　牛胎児血清を用い、RFLC-5、RRLC-11細胞につき、おのおのを175cells/plateまいてPEを比較した。

   　なお1)の対照として無処置のFCSと、塩析せず48時間透析した後凍結乾燥してHanks液で原量にもどした1/1FCSをおき、また2)の対照としても無処置のFCSと、塩析せず48時間透析した後さらに12時間Hanks液で透析した1/1FCSの実験群をおいた。

   　その結果1)の方法で作製した血清では1/1FCS、1/3FCSともにPEは対照のFCSに比して非常に悪く、とくに1/3FCSではcolonyの形成はいずれの細胞についても全く認められず、1/1FCSについても両細胞間にPEの有意差は全く認められなかった。

   　2)では対照のFCSにおけるPEが可成り低かったが1/1FCSでも1/3FCSでも両細胞とも少ないながらcolonyを形成し、1/1FCSではRRLC-11細胞のPEがRFLC-5細胞のPEより高かったが、1/3FCSではその逆の結果であった。

   　これと平行して行ったinoculum size 45,000のRFLC-5およびRRLC-11細胞の増殖に対するこれら血清の影響をみた実験では、前にも報告したようにRRLC-11細胞の増殖に比し、RFLC-5細胞の増殖は著明に抑制された。すなわちこれまでに得られたdataではmass cultureと少数細胞を扱ったPEの成績との間に不一致がみられるようである。しかし、これは技術の問題もあると思われるのでさらに検討しなければならない。

   　

2. RRLC-11細胞の放出する細胞毒性物質

   　前報につづき、モルモット血球を用いて血球凝集試験を行ったが、RRLC-11細胞を培養した4〜8日の培地では32倍、この培地をRFLC-5細胞にpassageして、細胞が変性をおこしかかった際の培地では256倍まで凝集が認められた。すなわち凝集価の上昇がみられた。また4単位のウィルス液(凝集がおこる最終稀釋を１単位とし、その4倍の濃度)を用い、2、3血清を用いて凝集抑制試験を試みた。血清はHVJ抗血清と生下時WKAラットの皮下にウィルス液を接種して生残った2匹のラットより採血した血清である。その結果抗HVJ血清では抑制はみられず、2匹のラット血清ではいずれも抑制がみとめられた。この際対照のウィルス液による凝集のおこり方がやや定型的でなかったので再度検討が必要である。またラット血清による抑制も抗体によるものかInhibitorによるものか検討しなければならない。

   　また培地(ウィルス液)を100倍に稀釋して受精10日卵のallantoic cavityに接種し、40時間後にallantoic fluidを集めて血球凝集をみたが3つの卵からえたallantoic fluidはともにnegativeであった。Allantoic cavityでは増殖しないもののようである。

   　このウィルスの細胞に対する感受性を検討しているが、ラット正常細胞の多くは変性をおこすが感受性にやや違いが認められ、またRRLC-11細胞をsuckling WKAラット皮下に接種して生じた腫瘤の再培養株3株についてみると、そのいずれも全く変性を示さなかった。これら3株の再培養株の培地はRFLC-5細胞に対し毒性を示さなかった。

   　細胞のこのウィルスに対する感受性につき、さらに広く検討する予定である。

   　電顕的検索で培養8日目のRRLC-11細胞はわずかにC型粒子が散見されるのみであり、またRFLC-5細胞にこのウィルスを加えて変性をおこしかかった時点で観察したが、核の変化が著明である以外にとくに明らかにウィルスと思われる粒子は証明されていない。しかしRFLC-5細胞が変性しかかった際の培地を40,000rpm 2時間遠沈し、その沈渣につきnegative stainingを行なうと20〜30mμの連なった多くの粒子を認めえた。この粒子がはたして細胞毒性物質の本態であるか否かはさらに今後の研究にまたねばならない。

   　現時点では血球凝集がみられるところからMyxo、Paramyxo系のウィルスあるいはrat virusと云ったものを想定している。

：質疑応答：

［高木］遠心で集めた場合の方がずっと小さく1/4以下です。培養しない培地からは出てきません。

［黒木］今まで知られているウィルスと同定できませんか。配列などから・・・。

［高木］こんなのは見た事もないと言われました。

［山田］Ratの内皮細胞を培養して電顕でみましたら、C型ウィルスがみられました。この場合毒性物質とウィルスガ同一のものかどうか、まだ問題ですね。

［吉田］Ratに特異性はあるのですか。又ウィルスそのものの作用でしょうか。

［高木］Rat以外の細胞ではみていません。

［勝田］耐熱性がない所から、あまり低分子の代謝産物とは考えにくいですね。

［高木］化学発癌との関係が難しくなりますね。化学発癌させた細胞にCPが出るかどうかも調べてみる予定です。

《堀川報告》

　まず、SM-1a細胞、RM-1b細胞、及びHeLaS3原株細胞における細胞当りのsulfosalicylic acid溶性SH(non-protein SH)量をEllman法によって培養一週間にわたり定量した（図を呈示）。増殖期においてnon-protein SH量は抵抗性細胞(RM-1b)において多く、感受性細胞(SM-1a)では少くなっていることがわかる。

　こうした結果はSHがＸ線のradical scavengerとして働くと考える今日の放射線細胞生物学的な考えと照合した場合、抵抗性細胞、感受性細胞の存在の可能性をうまく説明してくれる。これを反映してか、抵抗性細胞(RM-1b)および感受性細胞(SM-1a)を5000R照射した直後のDNAのsingle strand breaksをアルカリ性蔗糖勾配遠心法で分析した場合（図を呈示）、感受性細胞の方が僅かに多くの切断が生じるという結果が得られている。勿論この程度の切断では両細胞株ともに約30分間のincubationで切断DNAは再結合されてもとのDNAに修復される。(尚感受性細胞の方が切断量が多そうだという結果については現在更に検討中)。さて、一方東大医科研癌細胞学研究部からいただいたL・P3細胞および、これからCO60、γ線の反復照射によって得たL・P3γ細胞(金沢にきてから実験の都合上適当にこの名前にしている)について同様に感受性差等を検討しているので、これらについて現在までの結果を報告する。L・P3細胞、L・P3γ細胞ともに医科研癌細胞学研究部ではMEMのみで継代されているが、これではコロニー形成法による線量−生存率曲線も仲々描けないので、金沢に来てからは5％牛血清を添加して継代及び実験を行っている。

　まず結果についてであるが、5％牛血清の添加継代培養によってもL・P3細胞とL・P3γ細胞のもともとの形態的差異はそのまま保持されており、Cell growthを調べると（図を呈示）doubling timeでみるとL・P3γ細胞の方が僅かに長く、増殖能はL・P3細胞に比べてやや緩慢である。

　一方、コロニー形成能でみた２者のＸ線に対する生存率曲線は（図を呈示）、明らかにL・P3γ細胞がＸ線に対して抵抗性であることがわかる。これらの細胞株は今後上記HeLaS3細胞から得たＸ線抵抗性及び感受性細胞株とともに放射線感受性支配要因の解析にすぐれた材料となる。現在そのための実験が進められている。

：質疑応答：

［堀川］そうですね。UVの場合は感受性細胞が不安定になることは無いのに、Ｘ線感受性の細胞は何かとても不安定な細胞ですね。

［吉田］L・P3CO3の染色体組成はどうなっていますか。耐性細胞の場合に、染色体数が増えるとmozaicになる。それが耐性に反映しているとは考えられませんか。

［堀川］植物細胞では耐性が出来ると染色体は増えてゆきます。動物細胞ではγ耐性株などは染色体数はずっと少なくなります。

［吉田］動物細胞では染色体のploidyはそう増えられないのですね。それでもrecombinationによって安定な耐性株が出来るのでしょう。

［堀川］植物細胞で耐性が出来ると染色体数が増えるという実験をしたスパローは、染色体が増えると遺伝子も増えて耐性になると考えています。

［野瀬］Ploidyの多い細胞はDNA量も多いのでしょうか。

［堀川］DNA量がploidyの増加と平行して増えるという事を確かめた実験があります。

［吉田］SH量の変化は面白いと思いますが、細胞のどこにあるSHですか。

［堀川］細胞全体のSH量を測っています。

［吉田］どこのSHだか調べられませんか。

［堀川］定量値１点をとるのに細胞を10の9乗必要としますから、細胞を分劃してどこのSHの変動かを調べるというのは量的に難しいですね。

［山田］定量法も難しいですね。SHの機能は判っていますか。

［堀川］Radical scavengerだという事は判っています。放射線が2次的に出すfree radicalを減らします。Cell cycleの感受性もSH剤の添加で変化します。

［永井］物としてfreeのSHはどんな物ですか。glutathione、cysteineなどですか。

［堀川］はっきりしていませんが、そんなところです。

［黒木］Glutathioneが多いと発癌剤と結合して解毒される事がありますから、そういう効き方も考えられますね。

［山田］SHの定量にはくれぐれも気をつけて下さい。

［永井］一つのSH剤を測ってみるのもよいでしょう。

《山田報告》

　まず腹水癌細胞三系、ラット腹水肝癌AH66F、AH62F、マウスリンパ性腹水白血病細胞L1210についてのその泳動度と、染色体分布を比較してみました（図を呈示）。電気泳動度パターンは増殖期及び移植末期それぞれの成績を示してありますが、その平均泳動度と染色体のModal Numberは比例し、またその分布も略々平行関係にありさうです。そこで次に培養ラット肝細胞及びその変異細胞についてしらべました（表と図を呈示）。初めに染色体の分布の程度をmode周辺の分布域の幅のみをとりあげて泳動度測定時の標準誤差とを比較してみました。両者はRLT-5、Cule及びRLT-4を除くと略々平行関係にある様です。電気泳動度の分布はその増殖状態や細胞採取の技術的ミス及び細胞変性により多少変動しますので、この程度の相関は意味があるのではないかと考へました。

　次に平均泳動度と染色体modal numberとを比較してみました（図を呈示）。この両者はかなり良く比例する様です。即ちこれまで測定して来た細胞の電気泳動度及びその分布はそれぞれの染色体数及びその分布とかなり密接な関係がある様に思われます。

：質疑応答：

［堀川］染色体数が多いと泳動度が早くなるという事をどう考えますか。

［吉田］染色体が多いと細胞が重くなる？

［山田］細胞表面の性質も遺伝子の支配を受けていますから、何か染色体数と膜のチャージの間に関係があるのではないでしょうか。

［堀川］とすると、2倍体、3倍体の細胞でhybidを作って実験すると面白いでしょうね。

［吉田］エールリッヒ乳癌には、2倍体、3倍体、4倍体で継代されているのがありますから、よい材料になると思いますよ。

［山田］それはいいですね。ぜひやってみましょう。

［吉田］Mouseのfibroblastを培養していると培養初期は2倍体、それから4倍体になり、次に3倍体あたりに減少した時に悪性化するという報告があります。その各時期の泳動度を染色体と一緒に調べてみるのも面白いでしょうね。

［山田］ノイラミニダーゼに対する感受性が、細胞の悪性化につれて変化するという事も同時に確認できますね。

［藤井］転移しやすい癌と、しにくい癌との間に泳動度の違いはありますか。

［山田］同じ条件で細胞を集める事が難しいので調べてありません。

［藤井］転移と染色体の間に関係がありますか。

［吉田］4倍対の方が大きいので、血管内にひっかかりやすくて転移が多くなると考えている人もありますね。転移した細胞を調べると4倍体が多いようです。

《野瀬報告》

　発ガン剤の細胞に対する作用の一つとして細胞膜の性質の変化が考えられている。この細胞膜変化としては、長期的には表面荷電、化学的組成の変化、能動輸送の変化などがあるが短期的変化は比較的知られていないと思われる。

　今回はAlkaline phosphataseを細胞内酵素の一つとして、膜変化の検討を試みた。最初にL・P3細胞を4-QNOで処理し（処理法を呈示）、これをD-液に懸濁し、ALP-II活性の細胞外への放出を比較した。（表を呈示）無処理の細胞は細胞外にALP-IIをほとんど放出しないが、Deoxycholate、Triton X-100などを加えると30〜130％程度の活性が細胞外に流出する。これに対し、4-NQO処理細胞は、界面活性剤を加えなくても20〜30％の活性が細胞外に検出され、細胞膜が不安定になっていることが示唆された。

　次に、膜結合性酵素の一つであるALP-Iを持つRLC-10を用いて酵素の膜結合性を検討した。実験の方法は、超音波により細胞を破壊し、分劃遠心（図を呈示）を行ない、各分劃のALP-Iを測定した。ALP-Iは18,500g〜24,000gの範囲に50％以上沈でんとして回収される。この沈でんは細胞膜の破片と考えられ、ここに結合しているALP-IはTriton X-100、0.1％の処理でほとんど上清に移行する。4-NQO、1x10-6乗Ｍ、40時間処理した細胞および無処理の細胞を同様に超音波で破壊し、24,000g30分の遠心を行ない沈でん、上清の各分劃中ALP-Iを測定した（表を呈示）。4-NQO処理細胞ではALP-Iの上清、沈でんへの分布が変化している（4NQO処理細胞のALP-I活性は上清で減少し沈殿で増加する）。この結果が膜のどんな変化と対応するのかまだわからないが、4-NQO処理後、比較的短時間のうちにこのような変化が生じるのは興味あると思われる。

：質疑応答：

［野瀬］それはみてありません。

［山田］この処理条件では細胞が非特異的な融解を起こすとは考えられませんか。

［黒木］4NQOの誘導対も調べてみるとよいでしょう。

［堀川］どのcellステージで酵素を産生するのかも調べるといいですね。ある特異的な時期に酵素が合成されるようなら、その時期に4NQOを作用させたらどうなるかといった基礎的な所をしっかりおさえておくべきですね。

［高木］しかし、組織学的にみて100％染まるのではcellサイクルに関係なく産生されている酵素ではないでしょうか。

［野瀬］私もそう考えています。

［堀川］酵素の産生だけを抑える蛋白合成阻害剤はありませんか。そういうものを使って調べることも出来ますね。

［吉田］こういう酵素活性の誘導というのはセレクションによるものではないのでしょうか。ジンレベルから考えると−が＋になる所の機構は一体どうなっているのでしょう。

［野瀬］遺伝子としては皆持っているが、マスクされていると活性が無い・・・という事だと思いますが・・・。

《藤井報告》

　
1. ラットの試験管内4-NQO誘発癌、Cula-TCとその変異前期細胞が、contaminationで断絶したため、再びCulb-TCに代えて、isoantibodiesによるmixed lymphoid cell-tumor cell culture reactionへの抑制実験を試みることにし、準備中である。

   　

2. 本年、ヒト癌の自家リンパ系細胞刺激能を検討したうち、子供の神経芽腫の成績について記します。（表を呈示）

   　症例は、国立小児病院で手術されたもの。末梢リンパ系細胞収集はAngio-conray-Ficol法によった。腫瘍細胞は、浮遊液調製後、4,000R照射。MLC(Mixed lymphocyte culture)reactionは被検末梢リンパ系細胞の他人末梢リンパ系細胞に対する反応である。成績はH3-TdR摂取(刺激されたリンパ系細胞の)値では、各実験各個人によって、リンパ系細胞反応能が異なり、腫瘍細胞浮遊液中の細胞の分布も異なり、比較することが困難なので、混合培養とリンパ系細胞単独培養によるH3-TdR摂取値(cpm/tube)の比をとり、反応比として表した。

   　MLCは、患者H.F.が非常に低く、このようなばあいMLTRも低い。この例は濃厚な化学療法(Endoxan、Vincristin)が施行されており、末梢リンパ系細胞の収量も少く、その反応能も非特異的に低下しているものと判断された。全症例とも、多少の化学療法はおこなわれている。MLCの高くない患者H.K.例でも、MLTRは3.6で、とくに培養細胞を刺激細胞とすると5.0と高い。この培養細胞は、形態的にneuroblastome cellとみられたが、その他の同定は行なっていない。H3-Dopamineとり込みによるオートラヂオグラムを計画している。

   MLCが反応比31のように高いH.K.例でも、MLTRでは0.9と低く、このような例では、自家腫瘍に対するリンパ球反応はほとんど無いとおもわれる。

   　この成績から、神経芽細胞腫患者は、化学療法によるリンパ系細胞の機能低下があるにかかわらず、自家腫瘍に反応するもののあることがわかった。MLTRは、このばあいも、培養腫瘍細胞を刺激細胞に使った方が強い反応が得られる。

   　反応比3以上を陽性と仮にとると、5例中3例が陽性であった。

   in vitroにおけるリンパ系細胞の自家腫瘍細胞による幼若化刺激反応の本態については、かならずしも明らかでないが、in vitroで刺激されたリンパ系細胞の標的細胞破壊実験に成功しているので、さらに、その免疫学的特異性、in vivoにおける抗腫瘍性についての実験を計画している。

：質疑応答：

［藤井］腫瘍特異抗原があるかどうかをみるのを目的としています。特異性、抗原の問題はヒトの癌では扱えませんね。

［山田］もう少し分析できて解析できれば、サイミジンの摂り込みが少ないが、反応はあるのだというデータも活かせるのではないでしょうか。

［勝田］動物実験では化学発癌剤で作った癌の方が、自然発癌より抗原性が強いという報告もあります。

［藤井］化学物質によるものでもMCAによる癌の抗原性は強いが、ウレアによるものは弱いというのがあります。

［山田］In vitroでの自然悪性化の場合はポピュレーションの問題も考えなくてはなりませんね。全部が同じように悪性化していないかも知れません。

［黒木］ハイデルバーガーの所でも自然悪性化系は抗原性が弱いと云っています。

［藤井］動物実験でなら、化学発癌の過程での癌に対する宿主の反応をこういう方法で調べてゆけるだろうと考えています。

［山田］癌の出来はじめ程、生体に強い反応を起こさせるという実験がありますね。

［吉田］染色体の上ではウィルス発癌のものは、たいてい宿主の正常の染色体構成からあまり変わっていないが、MCAで悪性化したものなどはdeviationが大きい。染色体の上でのdeviationが大きくなると抗原性が大きく変化するとは考えられませんか。

［勝田］そういう所をがっちりおさえて貰えると良いのですがね。

［藤井］フェリチン抗体を使って細胞膜上の抗原の分布を調べている実験がありますが、そういう事がきちんと出来るといろんな事が判りますね。

《黒木報告》

　レプリカ培養によって紫外線感受性細胞の分離を試みた。方法は次の通りである。

　
1. FM3A細胞、L5178Y細胞をMNNGで0.05〜1.0μg/ml/100万個cells/h at 37℃の条件でincubateし、MNNGを除いたのち、2日間TD-40で培養する。 　
2. 平板寒天上(0.5％Noble)に500、1,000/90mm dishにまき2wk培養。 　
3. ガラス棒で4枚のシャーレにレプリカ培養する。No1、3をcontrolとし、No2、4にUV50erg照射する。7〜10日後、50erg照射で増殖できないコロニーまたは非常に小さいコロニーを探し出し、ふたたびレプリカ培養を行い、同様に50erg照射する(写真を呈示)。 　
4. 2回目のレプリカでも50ergで増殖できないコロニーを、浮遊培養にうつし、増殖させたのち、5、20、50、100ergでdose-responseを調べる。

　現在3のstepまでであるが、いくつかの感受性クローンがとれている。（表を呈示）１％前後の高率でUV感受性細胞がとれ、目下dose-responseの詳細を検討中である。また、この方法を用いて温度感受性細胞(39℃)の分離を試みている。

：質疑応答：

［勝田］33℃で増殖するようになるのはadaptationですか。selectionですか。

［黒木］Adaptationだと思っています。

［勝田］Adaptationだとすると実験中に又戻ってしまう心配もありますね。

［堀川］レプリカというからには、つま楊枝法よりビロード法の方がエレガントな気がしますね。

［野瀬］細菌のコロニーでも、つま楊枝法でレプリカをやっている人があります。

［堀川］UV感受性については、MNNG処理なしでも拾ってみましたか。

［黒木］やっていません。50ergのUVはwildのFM3Aでは20〜30survivalという線量です。

《佐藤二報告》

：質疑応答：

［佐藤］B3というrat liver由来で600日以上培養している系は、腫瘍性をもっていなくて正2倍体です。しかし増殖は早くなっています。

［勝田］正2倍体のチェックはどうやっていますか。

［佐藤］簡単にスケッチしてテロセントリック、メタセントリックの数を数えます。

［山田］腫瘍の染色体分析ではin vivoの系を使った吉田先生のステムライン否定というのがありますね。１コの細胞を拾って移植しても増殖してくると、必ずバラツキが出るから腫瘍にはステムラインはないのだという訳です。

［佐藤］培養内でのバラツキは培養内での変異率とも併せて考えなくてはと思います。

［吉田］私はこのデータでは思ったよりずっと安定したものだなと感じました。in vivoだと宿主側から色んなselectionがかかってステムが残るという事が考えられるのですが、in vitroではもっと色んな系が出て来ても不思議はないと思います。

［佐藤］JTC-11は培養の条件に充分adaptしている系なので、もうselectされてしまっていて安定なのでしょうか。

［堀川］培養細胞の色々な変異は10-5乗〜10-6乗generationの頻度ですから、染色体レベルでも変わり得ますね。染色体の変異とchemicalな変化とが、どの程度corelateしているものでしょうか。それから正常細胞の染色体レベルの変異が腫瘍細胞の変異ほど頻度が高いのかどうか知りたいですね。

［佐藤］バラツキからみると正常細胞の方が少ないと思います。しかし正2倍体を拾ってゆくことは大変な労力がかかりますね。細胞の１コ釣は特に難しい。むしろ環境因子を考えた方が早いと思います。例えばホルモンを添加するとか。

［吉田］遺伝子のレベルの変異と染色体のレベルの変異は次元が違いますね。

［佐藤］ヒトの細胞は2倍体を頻度高く維持できますが、2倍体のまま増殖が止ります。

［堀川］生体の中での事と合わせ考えて、早く増殖させると変異が多くなるでしょうか。実験としては増殖をおとすと、例えば温度を下げるとか培地をpoorにするとかすると染色体レベルの変異が増えるでしょうか。減るでしょうか。

［勝田］増殖の問題はDNA合成の問題以外に細胞間物質の問題があると思います。どんどん増殖すると細胞間物質をためるひまがなくて、それが変異にも関係するでしょう。

［佐藤］培養細胞は癌でも正常でもない勝田班長の云う第3の細胞かも知れませんね。

《吉田報告》

　クマネズミ(Rattus rattus)にはアジア型とオセアニア型があり、前者は2n＝42及び後者は2n＝38である。オセアニア型はアジア型のもつ4対のacrocentric染色体のRobertsonian fusionによって生じたと考えられた。アジア型は東及び東南アジアに分布するが、オセアニア型はオセアニア(オーストラリア、ニュージランド及びニューギニア)、ヨーロッパ、北米、南米、及び南アフリカまでに広く分布している。クマネズミは東南アジア大陸の原産といわれているので、アジア産クマネズミはヨーロッパへ移動する途中で、染色体のfusionが起って2n＝38のオセアニア型が生じたと考えられた。2n＝42と2n＝38の境界線を調べるためと、両者の移行型(若し棲息するとすれば2n＝40)を発見する目的をもって、私達一行4名は9月27日より11月22日まで、西南アジア、中近東方面のクマネズミの染色体の調査を行った。調査の結果は（分布図を呈示）、2n＝38と2n＝42の境界はインド、パキスタンの中央部を走り、カスピ海附近に抜けている。またセイロン島のKandyで両者の移行型すなわち2n＝40の染色体をもつクマネズミが発見された。