【勝田班月報：７３０３：SytochalasinBによる細胞の無核化】《勝田報告》ラット肝癌細胞の放出する毒性代謝物質についての研究
《永井報告》§ラッテ腹水肝癌AH-7974細胞の培地内に放出する毒性代謝物質：化学的プロファイルこれまでラッテ腹水肝癌細胞AH-7974が培地内に放出する毒性物質について化学的な面から追究をおこなってきた。ここでは、これまでの研究成績を振り返って、一つの総括をおこない、今後の研究への足がかりとしたい。
：質疑応答：［堀川］この毒性物質は細胞のどこをアタックするのですか。［勝田］合成系をやっつけるというより、もっと積極的に殺しているようですね。 ［山田］合成系をアタックする場合は、先ず核に異常が起こるはずですね。 ［松村］スペルミン、スペルミジンは癌細胞に対しても毒性をもっていますか。 ［藤井］なぎさ変異の細胞に対してはどうでしょうか。 ［高岡］まだJTC-25・P3についてのデータしか持っていません。 ［永井］こういう物質で癌細胞かどうか同定できると面白いですね。 ［堀川］JTC-16の培養液からとれる物は、スペルミンそのものではないが、スペルミンに一寸修飾が加えられたようなものかも知れませんね。 ［永井］低分子物質の分劃は塩との分離が難しいのが難点ですね。 ［勝田］今のところ、はっきりしているのはラッテの腹水肝癌由来の培養細胞は強弱はあっても皆、培地中に正常肝細胞に対する毒性物質を出しているということです。まずはJTC-16を材料にしてその毒性物質が何かを決定して、それから他の肝癌の出すものを同定しようとしているのです。 ［乾 ］培地からだけとれる物ですか。細胞をすりつぶしても出てきませんか。 ［勝田］そもそも端緒は双子管培養で液層を通じての相互作用をみたことから始まっているのです。ですからその液層を先ず分析したのは、その線を通している訳です。 ［藤井］担癌動物の血清中にはその物質は出ていませんか。 ［高岡］物質としてはっきり決定されれば、その物が血清中や腹水中に出ているかどうか調べるのは簡単でしょうね。しかし材料として血清を使うのは分劃が大変です。なるべく単純な組成のものを材料にした方が分劃は楽だと思います。 ［勝田］物が決まれば、診断などにも使えるかも知れません。又動物実験にもっていって免疫機構に関係があるかどうか調べてみるつもりです。 ［野瀬］スペルミンを失活させると毒性はどうなるでしょうか。 ［永井］そういう実験も考えていますが、スペルミンそのものではないだろうと思っています。培地に出るものという事からホルモンのようなものも考えています。
《高木報告》
：質疑応答：［梅田］このウィルスは発癌性についてはどうなのでしょうか。［高木］私もそれを考えて動物に接種してみましたら、はっきりした結果を得られないうちに死んでしまいました。解剖してみましたが、発育不良と肝の一部に石灰化の所見があっただけでした。 ［佐藤二］培養しているだけではウィルスの存在はわからないのですか。 ［高木］正常な細胞とかけ合わせないと分からないのです。 ［佐藤二］人とかマウスとか他の動物由来の細胞にはどうですか。 ［高木］人には無害だと思います。猿由来の細胞は変性しません。マウスについてはデータはありません。 ［山田］電顕はほんの一部をみるだけですから、全くウィルス粒子がないと言い切るには相当沢山の標本をみなくてはいけませんね。 ［高木］そうですね。全くないとは言い切れませんね。それからこのウィルス様のものは血清の影響を強く受けます。仔牛血清では出ないが牛胎児血清では出ます。
《山田報告》(But)2cAMPの細胞膜への直接作用についての基礎実験成績を報告します。（各実験毎に図表を呈示）細胞はほとんど腹水肝癌AH66Fです。(But)2cAMP、Neuraminidase、Trypsinを相互に作用させた結果を示します。Neuraminidaseの作用条件条件は従来通りでLBC製のものを10unit用いています。(But)2cAMPを作用させると細胞の表面荷電は上昇し、しかもあらかじめneuraminidase処理しておくと、この効果は増強しました。しかもこの効果はConAの作用とは異り、シアル酸依存荷電が新たに露出するためではないことがわかります。トリプシン処理ではこの効果は変化ありません。 またあらかじめneuraminidase処理しておいた後の(But)2cAMPの効果には定量性があり、この効果は細胞膜の特異的変化であることを確かめました。 即ち(But)2cAMPと比較の意味で、CiAMP、AMP、Trypsinをそれぞれ作用させてみますと、(But)2cAMPに特に著明に、そしてcAMPでは軽度の泳動度増加作用があることがわかりました。即ち(But)2cAMPの特異的な作用と思われます。 次にneuraminidase及び(But)2cAMP処理後のConAの作用をみました。ConAの泳動度上昇の効果は著しく阻害され、通常では既に細胞の凝集を起こす様な濃度でもその作用が極めて少く、100〜200μg/mlの濃度で若干の泳動度の増加をみるのみでした。 最後に(But)2cAMPの腹水肝癌と正常及び再生肝に及ぼす効果を比較しました。先きに示しました様に肝癌細胞は(But)2cAMPにより強く反応しますが、一般に良性の肝細胞の反応は著しく弱く、両者の最も異る點は、Neuraminidase処理後の(But)2cAMPの効果です。正常肝は肝癌に比較して泳動度の増加が著しく弱い様です。この成績はまだ荒けずりの成績ですが、これから、この作用条件を充分検討し、in vitroにおける悪性化の指標の一つに(But)2cAMPの効果の違いが役に立ち得るか否かを検討して行きたいと考えています。
：質疑応答：［勝田］細胞電気泳動にかける時、肝細胞はどういう方法で分離していますか。［山田］動物から肝臓を取り出し、鋏で切ってメッシュで漉すだけです。 ［梅田］生死判別はしてありますか。 ［山田］してありません。 ［梅田］正常肝細胞は、集め方が悪いと電顕的にみて膜に穴があく事があります。 ［勝田］還流法などを利用してみたらどうですか。 ［山田］私も昔ヒアルロニダーゼなど使ってみた事はありますが、酵素を使うと膜に変化が起こってよくないようです。 ［堀川］しかし泳動中に色んな反応がないのは、むしろ死んだ為ではありませんか。 ［山田］その点も考えて、できれば培養細胞を使いたいと思っています。 ［勝田］再生肝の場合必ずしも全体が増殖している状態ではないでしょうね。 ［山田］私の場合、肝臓は2/3切除して、再生というより急性肥大しているような術後2日目のものを使っています。ConAはそれ自身に荷電がないので膜の変化といっても良いと思いますが、(But)2cAMPの場合はそれ自身の荷電があるので、それが影響しているのかとも考えられますが・・・。 ［梅田］Butyrateだけではどうですか。 ［野瀬］Butyrateだけで起こる変化もありますね。(But)2cAMPはコルヒチンで抑えてみたらどうですか。 ［堀川］というのは・・・。 ［野瀬］(But)2cAMPで起こる形態変化はコルヒチンで抑えられます。 ［堀川］(But)2cAMPを直接肝癌細胞に作用させると泳動値が減少するが、neuraminidaseで予め処理してから(But)2cAMPを作用させると上昇するというのは、(But)2cAMPの取り込み方が違ってくるからでしょうか。 ［山田］そうかも知れません。 ［勝田］電気泳動で捕まえられるのは本当に膜の表面の荷電だけですか。 ［山田］理論的にはそのはずです。 ［堀川］膜が細胞内を支配するかも知れないが、細胞内の変化が膜に影響を与える事も考えられますね。
《堀川報告》培養された哺乳動物細胞用のレプリカ培養法を使用してChinise hamster hai細胞から各種栄養要求株、または非要求株を分離し、これらについてforward mutationおよびreverse mutationの機構を解析しようとする試みはこれまでに報告してきたとうりである。しかし、こうした仕事を進めて行くうえで問題になってくるのは、私共の仕事も含めて、従来のPuck、Chuたちがこの方面の研究のために使用してきた細胞はいづれもChinise hamster由来の細胞であるということで、こうしたChines hamster細胞から得たデータをもとにして人間細胞におけるmutation rateあるいはmutationの機構を語るのには多少の不安がある。（図を呈示）図に示すように、紫外線照射後細胞内DNA中に誘起されたThymine dimer(TT)の除去能が細胞間で大きく異なる。つまりDNA障害修復能が多分に異なるという結果が分かっている。mouseＬ細胞にはTTの除去能は殆ど認められず、Chinese hamster hai(CH-hai N12 clone)では照射後12時間以内に約19％のTTを除去する能力をもち、ヒト由来HeLaS3細胞では50％のTTを切り出す能力をもっている。またこのHeLaS3細胞から当教室において分離したUV感受性株のS-2M細胞では照射後12時間以内に約9％のTTしか切り出さないことが分かってきている。こうした細胞間のTT除去能の有無はUV-specific endonucleaseの有無に関係しているようで(Alkaline sucrose gradient centrifugationの実験から示唆される)、こうした細胞株間というよりも異種起原の細胞株間のTT除去能についてみても、これ程異なるため、同一条件下でMutation rateまたはその機構を追ってみる必要性が生じてきた訳である。こういった意味において現在私共は上記栄養要求性変異実験と併行して、HeLaS3細胞、S-2M細胞、mouseＬ細胞、Chinese hamster hai(CH-hai N12 clone)細胞の4種を選び、8-azaguanine抵抗性を指標にしてmutation rateおよびその機構の解析をはじめた。これら4種の細胞は上記のTT除去能以外にもgrowth rate、chromosome number、UV感受性等の点で異った性質をもつため今後の解析は面白くなると思う。学年末で多忙のため詳細は示せなかったが、次の機会にこれらについて詳細に報告する予定である。
：質疑応答：［勝田］原株にはラクトアルブミン水解物が入っているのですか。［堀川］それにパイルベイトが入っています。 ［黒木］その株は以前私が培養していた頃は、パイルベイトとセリンを添加してラクトアルブミン水解物は入っていませんでした。 ［堀川］Mutationと癌化をどう関連づけたらよいのでしょうか。化学物質による変異そのものは捕まえられると思います。その変異の機構の追跡も可能だと思いますが、発癌の機構を追うとなると、パイルアップコロニーでパッパッと数を出してゆくというようなやり方でよいものかどうか・・・。何かよい指標はないものでしょうか。 ［佐藤二］この実験で使っているのは殆ど癌細胞ですね。癌細胞と正常細胞とでは、変異→発癌の機構が本質的に違うのではないかと思いますが・・・。 ［堀川］少なくとも変異の機構については本質的に同じだと思います。 ［勝田］培養内では色んな方向への変異が始終起こっていると考えています。それを培地中のある種のペプチドがセレクションをかけているというような事も考えられるので、さっき培地にラクトアルブミン水解物を使っているのかと質問したのです。 ［黒木］最新のPNASに正常人由来のリンパ球と白血病細胞とではDNA polymeraseの読み取りが違う。白血病細胞のpolymeraseは間違いが多いという論文が出ていました。癌というのは菌の突然変異のように一時的に起こるものではなく、何か連鎖的な変化の産物ではないでしょうか。 ［堀川］私の実験も本当は正常由来の細胞を使いたいのですが、使いやすい系となると、こういう細胞になってしまうのです。 ［梅田］ヒトの2倍体細胞からは8アザグアニン耐性株がとれないと聞いていますが、何か理由がありますか。 ［堀川］出来ないというより取り扱いが大変難しいので、やらないのではないでしょうか。哺乳動物細胞は変異率の高いものと低いものとの差が大きいですね。 ［梅田］それは何故でしょうか。遺伝子が多いからでしょうか。 ［佐藤二］レントゲンで耐性株を拾っても、それがレントゲン照射によって変異したものなのか、突然変異によるものなのか、どうやって見分けるのですか。 ［堀川］レントゲンにしろMNNGにしろmutantがinduceされると考えています。始からpopulation中にあることはあるでしょうが。私としては単なる変異と化学発癌とをどう結びつけるかが、当面の問題だと思っています。
《佐藤二郎報告》Donryu系ラッテの肝臓は勝田の組織片回転培養で実質細胞を選択培養できる。然し培養日数の経過と共に染色体数の変化と核型の変化を生じて形態学的似も多型性、異型性を生じ、培養850日前後で自然発癌する。
：質疑応答：［高木］トリプシナイズする時の材料はどの位の大きさのラッテを使うのですか。［佐藤］生後7日です。接種細胞数を減らすと上皮性のコロニーがとれ易いですね。 ［梅田］アルブミン産生能はこの4種類の内のどの細胞にあるのですか。 ［佐藤］この4種類はきちんと調べてはありませんが、小さい方の上皮様細胞に産生があったと思います。しかし今培養できているものは成熟型の肝細胞ではないようです。 ［乾 ］4倍体近くのピークは正4倍体ですか。 ［佐藤］違います。 ［乾 ］顕微分光光度計を使ってDNA量を測ってみますと、ラッテでは生後2日には4倍体はなく、１週間では15％、１カ月では40％の4倍体がありました。 ［勝田］肝細胞には2核細胞が多いのですが、その4倍体は１つの核ですか。 ［乾 ］１つの核です。 ［梅田］G2期のものとは考えられませんか。 ［乾 ］そうかも知れません。 ［黒木］細胞の継代法は・・・。 ［佐藤］15万個/mlで植え込み、週2回餌かえ、3週間で継代しています。 ［黒木］継代しないでおく方が2倍体の維持はいいのではありませんか。 ［高岡］ラッテ腹膜由来の細胞ですが、3年以上も正2倍体を保っていたのがありますが、なるべく増殖を抑えて、継代もあまり頻々とはしていません。 ［佐藤］トリプシンの影響があるでしょうが、血清も関係がありそうですね。 ［乾 ］正2倍体を維持していて、染色体が乱れはじめた時期では動物に接種してもtakeされないというのは、どうお考えですか。 ［佐藤］悪性化に前癌のようなものがあると考えています。それからmass cultureでもsingleを拾ったものでも、動物にtakeされるようになるには培養日数がある長さ、何年かが必要なようです。 ［乾 ］私の実験でMNNG処理の例ですが、処理後2倍体からずれて小さなピークが出来、動物にtakeされる時期にはそのずれたピークが大きくなっている、というのがありますが、先生のはtakeされる時期にあまり収斂しないようですね。 ［黒木］cloningしないと2倍体の維持が出来ないのは、2倍体の方が増殖がおそくsaturation densityが低いので、select outされるという事ではありませんか。
《乾報告》Kentackyタバコ、マリハナタバコ煙の組織培養細胞に対する影響：今月は、昨9月〜11月スイス国立癌研滞在中の仕事の報告を致します。タバコの煙が動物に投与した時、気管支上皮に変性をおこし、又同上皮細胞の芳香族炭化水素活性化酵素の活性の上昇を誘導することが知られております。又タバコタールは培養細胞に悪性転換をもたらすことも同時に知られ、他方マリハナは直接投与により組織培養細胞に細胞学的、染色体形態的変化を誘起しないという報告が多い現状です。 今回の実験はKentackyタバコ煙をPositive Controlに使用し、マリハナタバコ煙の人起原細胞に対する細胞学的影響を細胞核DNA量の変化、染色体数を指標として検索してみました。 材料として25才の正常男子の肺起原繊維芽細胞を用い、DulbeccosMEM＋20％CS、5％炭酸ガスの条件下で培養し、単層培養直前の状態で培地を取り去り、研究所Kentacky Standeredタバコ、及び同タバコに一本当り0.5gのマリハナを混合したタバコ煙をStandered Smoking Machine(Filrona CSM12)で次の条件下で作用した。作用条件は各回の露出時間を8秒とし、58秒間隔で8回のPuffを行った。Paff直後37℃のHanksで一回洗滌後、通常の培地で培養し、作用後3、6、12、28日目の細胞を固定、一部はFeulgen染色後分裂核についてmicrofluorometryを行なった。一部は低張処理後、通常の方法でAir-dry、Giemsa染色し、染色体観察を行なった。DNA測定の結果は(図を呈示)、分裂中期後DNA量の分布の幅は、正常細胞核のそれに比して大きい値を示した。Kentacky、マリハナタバコ煙火煙作用の両者を比較すると前者ではDNA量は増大の傾向、後者では減少の傾向がみられた。分裂後期核DNA量の変化は略々分裂中期細胞核のそれと同様であるがその変量の度合が大きかった事実は、タバコ煙、マリハナタバコ煙処理細胞が核分裂の際、不均等分裂の頻度が増大することを、示唆していると考えたい。タバコ煙、マリハナタバコ煙投与後の染色体数の経時的変化は(図表を呈示)、Kentackyタバコ煙投与の染色体数の変化は、投与後3日では著明でなく、12、26日と日時の経過と共に変異細胞数が増大し、染色体数変化は増加の傾向を示した。マリハナタバコ煙投与群の染色体変異は投与後3日目に表われ、染色体数45の細胞の出現頻度は時間の経過と共に減少し、投与後26日では10％であった。これに反し相対的に染色体数47以上の細胞の出現頻度が増大し、対照に比して細胞分布の幅は大きかった。
：質疑応答：［梅田］煙りにさらす時、controlはどうするのですか。乾いてしまう心配は・・・。［乾 ］対照は同じ時間だけ煙なしでさらしておきますが、この位の時間では乾いてしまう事はありません。 ［堀川］ケンタッキーとマリハナは本質的にどう違うのですか。 ［乾 ］マリハナは１本当たり0.5g加えてあり、煙の粘度が高くなりますね。 ［堀川］マリハナタバコは社会的問題にはなっていないのですか。 ［乾 ］一過性には精神状態がオカシクなって、窓から飛び降りたりするそうです。それから白血球の培養にマリハナの主成分を加えてやると、染色体の切断が起こることが知られています。 ［堀川］染色体数変化にケンタッキーとマリハナでは結果に差がみられませんが、染色体の切断はどうですか。 ［乾 ］ヒトの肺細胞では切断は起こりません。ゴールデンハムスターの肺細胞で切断が起こりますが、ゴールデンハムスターは何故か他の物質でも切断が起こり易いのです。 ［黒木］成分を精製できていますか。煙より培地に溶かした方が定量的でしょう。 ［乾 ］白血球にはエキスを添加しました。煙の方がマイルドです。 ［堀川］タバコとＸ線の相乗ではすごい発癌作用があると云われていますね。 ［勝田］それは細胞レベルではどうですか。 ［乾 ］細胞レベルでのタバコの発癌実験が少ないので、まだ判っていませんね。 ［勝田］どういう事ですかね。 ［堀川］どういう事が起こるのか、ぜひ細胞レベルでの実験をやってみたいですね。 ［乾 ］タバコの実験は仲々条件がはっきりしなくて、やりにくいですね。 ［佐藤］吸ったり止めたりというのが、どう影響するのかデータがありますか。 ［勝田］ハムスターは煙草を吸った事がないから煙草煙で染色体が切断されるのかな。 ［松村］この装置は煙草の煙以外の、例えば一酸化炭素などの影響はありませんか。 ［乾 ］あることは有りますが、ヒトが吸う場合と同じように・・・。 ［松村］一酸化炭素があっても一向に差し支えないというわけ・・・。 ［堀川］8秒吸って53秒休むというのも合理的ですね。実際そんな具合に吸ってますよ。 ［藤井］煙草の煙でないもので、煙だけ吸うという対照は必要ないでしょうか。 ［黒木］フィルターなしではどうですか。 ［乾 ］フィルターなしでこの条件では細胞が皆死んでしまいます。
《梅田報告》
：質疑応答：［黒木］PE/変異率で現すとかえって判りにくくなるのではありませんか。個々の濃度でみた方がよいと思います。D/D0が一番信頼できるでしょう。［堀川］考え方としてもう少しsimpleな方が良いでしょうね。 ［黒木］pHを重要視したのは何故ですか。 ［梅田］私自身の実験系で、どうも発表されている他の人のデータより変異の時期が遅れるのは何故か考えているうちに、pHなどが怪しいのではないかと思いました。 ［黒木］培地のpHをいくら調整しても、培養を始めると簡単に変化してしまうというdataがありますね。HEPESではpHの維持が一定になるでしょうか。 ［梅田］かなり安定ですが、矢張りピッタリというわけにはゆきません。
《野瀬報告》Cytochalasin Bによる細胞の無核化Alkaline phosphatase活性の調節機構を研究するための、一つのアプローチとして細胞融合による方向を考えている。その場合、融合する細胞の片方が無核細胞であれば、その遺伝情報を考慮する必要がなく、解析が容易になると思われる。そこで、細胞の核を抜く条件の検討を行なった。 無核化には、最近、カビの代謝産物の一つであるcytochalasin Bがよく用いられている。この薬剤を2mg/mlの濃度でDMSOに溶かし、0.5〜10μg/mlになるように培地に加えて細胞の形態を観察した。使用した細胞株はL・P3、JTC-25・P5、RLC-10、JTC-21であるが、核が著しく細胞質から突出してきたのはJTC-21であった。この細胞は元来DM-145で継代されていたが、実験に用いる際はcalf serumを2％加えてある。cytochalasin 2μg/mlの濃度で加え、2〜3時間37℃で培養するとかなりの数の細胞の核が突出してくる。これ以上の濃度では細胞質の縮退がおこり細胞に障害がある。無核の細胞は、cytochalasin B処理を24時間続けても１％程度しか出てこないので、この細胞に遠心力をかけてみた。細胞をglass cover slipに生やし、cytochalasin B処理をし、次に、Spinco SW50Lで、１万rpm 30分の遠心を行なった。この場合、遠心管内には薬剤を2μg/mlに加えた培地を入れておく。遠心後、methanol固定し、Giemusa染色して、一定視野内の有核、無核細胞を数え無核化の頻度を測定した（表を呈示）。遠心を行なうと80％以上の細胞が核を失ない、細胞質だけになった。細胞をあらかじめ薬剤で処理せずに薬剤存在下で遠心しても同様な結果が得られたので、前処理は必要ない。遠心する場合、glass cover slipが割れることが多いので多量の細胞を処理するのが困難である。 次に無核細胞を分劃することを試みた。有核と無核とは比重が異なることが予想されるので、Ficollの密度勾配上に細胞をのせて遠心し、細胞の分布をみた(図を呈示)。この実験では、予備実験としてL・P3細胞を用いて行なった。細胞は遠心後各Ficol層に分布し、幾つかの分劃に分れた。それぞれのDNA/proteinの比を較べると、遠心管の上層に分布している細胞の方がこの比が小さく核の有無によって分劃される可能性は十分考えられる。しかしJTC-21細胞では、まだ十分量の細胞が集められないので分劃は行なっていない。 JTC-21細胞はalkaline phosphataseIの活性が高く(比活性>10,000 units/mg protein)、その性質が安定なので、この細胞質と、この酵素活性が低い細胞とを融合して活性の変化を見たいと思っている。
：質疑応答：［梅田］遠心沈殿中にカバーグラスが壊れませんか。［野瀬］壊れます。色々やり方を工夫しています。プラスチックのカバーグラスでやり直してみようとも考えています。 ［梅田］ローターはスヰングですか。 ［野瀬］そうです。 ［堀川］フィコールで分劃する他に、BUdR→光という処理を使ってみたらどうですか。 ［野瀬］無核細胞は、そう長く生きていられないので、時間的に無理だと思いますが。 ［梅田］サイトカラシンの処理前にBUdRをかけておけば後は光をあてるだけですね。 ［黒木］サイトカラシンを処理してフィコールで沈殿させればどうでしょうか。 ［梅田］脱核の機構はどうなっているのですか。サイトカラシンBは多核も出来ますね。 ［堀川］細胞質だけの細胞の動きはありますか。 ［野瀬］映画はまだ撮っていません。
《黒木報告》[レプリカ培養によるUV感受性細胞の分離]レプリカ培養方法を用いてL5178Y(DBA/2マウスリンパ球性白血病)、FM3A(C3H/HeNSaマウス乳癌細胞)よりUV-感受性細胞を分離した(分離方法の図を示す)。
[結果] （表を呈示）最終的にUV感受性と判定されたCloneは、L5178Yから6、FM3Aから１である。このほか現在dose-responseカーブでV37、Vq、n値を測定中のものがいくつかあるので、さらにふえるであろう。FM3AとL5178Yを比較すると、後者の方が変異率が高い。その理由はよく分らない。この１％前後の率は従来の報告よりも非常に高いが、それは一つにはレプリカ培養を用いたことと、また、細胞の特殊性があるかも知れない。変異率はMNNGの濃度と関係があるかどうかは目下MNNG 0の群をおいて調べているところである。 (図表を呈示)UV感受性細胞のdose-responseカーブ及びD37、Dq、nをみると、D37値で約1/3〜1/2に減少している。9〜11ergという値はXero.derma pigment.の細胞とほぼ等しい。現在、これらの細胞の修復のメカニズムを行いつつある。
：質疑応答：［堀川］変異率が高いですね。このUV感受性がmarkerになるかどうかが問題ですね。Xerodermaの細胞ののように感受性が高ければはっきりします。［勝田］安定性も問題ですね。 ［堀川］感受性、耐性というのはなかなか難しいですね。栄養要求の場合はall or noneでゆくのが取り柄です。 ［勝田］耐性株もとっておく必要がありますね。 ［黒木］今やっています。
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