−− IFO50267 PB-3c細胞の培養について −−
IFO50267 PB-3c細胞はIL-3依存性の細胞株です。このため、培養のためにWEHI-3b
conditioned medium(WEHI CMと略)を使用するように指定されています。
培養液の組成は下記の通りです。WEHI CMは必須です。本細胞株は凍結に弱く、
解凍時に大量に細胞が死滅します。バンクの試験では、対数増殖期では2-MEを添加
しなくても培養できますが、解凍からの立ち上げ時に添加していないと細胞死が
増加し、その後の増殖は期待できません。下記の培地組成はかならず守るように
してください。
RPMI1640 medium: 70%
fetal bovine serum: 10%
WEHI CM: 10%
2-mercaptoethanol: 50 uM (バンクの試験では、15 uM程度で大丈夫)
WEHI CMの調製：
１．マウス単球系細胞株WEHI-3b (登録番号IFO50296)をRPMI1640 medium with
10% FBSで培養する。
２．対数増殖期、コンフルエントに近い状態の培養上清を1000 rpm, 3-5 minの
遠心で得る。
３．0.22 umのフィルターを用いて濾過滅菌する。
４．冷蔵保存し、できるだけ速やかに使用する。なお、保存時にはポリプロピレンの
容器を用いるべきです。ポリスチレン製の容器で保管したところ、培養が不調に
なったケースがあります。IL-3が吸着されたためだと思われます。
IL-3の効果の検討
【方法】対数増殖期のPB-3c細胞を24 wellプレートに8.2 x 10^4 cells/ 1 ml /wellに
播種し、次の各処理を行った。培養42時間後に細胞数を計測した。
1) control (none)
2) 0.005 ng/ml IL-3
3) 0.05 ng/ml IL-3
4) 0.5 ng/ml IL-3
5) 5 ng/ml IL-3
6) WEHI CM (5%)
IL-3はGIBCO/BRL, murine recombinant (activity, 3.2 x 10^4 units/ug)を使用した。
【結果】結果を表に示す。
IL-3 (ng/ml) Number of cells 倍加時間
(x 10^4) (hr)
control 0
0.005 0
0.05 0.4
0.5 18.4 36
5 29.6 23
WEHI CM (5%) 30.9 22
IL-3を用いた培養は、細胞の寄託者から指定されたものではありません。この結果は
IL-3依存性増殖のみを確認したものであり、WEHI CMの代替として培養、維持にIL-3を
用いた場合の細胞の性状については検討しておりません。
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